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在ELISA實驗中如何準確的稀釋樣本

發布日期:2024-01-16 17:09:40   瀏覽量 :62
發布日期:2024-01-16 17:09:40  
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一、在ELISA實驗過程中,超過試劑盒檢測范圍的,一般有這幾種情況。
1、樣本中待測物含量過高。一些高豐度蛋白來說,比如免疫球蛋白、脂聯素、C肽、載脂蛋白等,在樣本中本身含量就很高,有的達到mg/mL濃度。

2、一些受誘導表達的細胞上清中,大量表達,比如小鼠細胞誘導后,大量表達腫瘤壞死因子α(TNFα),小鼠胰島細胞受誘導后,大量表達胰島素(INS)。

3、在一些感染性疾病中,大量表達,比如乙肝表面抗原、C反應蛋白。

4、疫苗原性研究時,注射疫苗的小鼠,會產生大量針對疫苗的抗體。

5、一些被濃縮的樣品,比如重組蛋白的產物,單克隆抗體純品等。

二、在ELISA檢測過程中,經常會遇到樣本測定OD值超過標曲最高點OD值,造成測定數據無法直接使用。那么樣本稀釋容易犯的錯誤有哪些?

1、稀釋不足。稀釋倍數不足時,容易導致最終結果偏小。

2、過度稀釋。過度稀釋時,容易導致最終結果偏大。

3、稀釋不夠規范,引入很多人為偏差。稀釋不夠規范,特別是大比例稀釋時,人為偏差大大增加。

三、樣本稀釋的原則如下:在查詢背景知識,或者通過預實驗,確認了樣本濃度過高,需要進行稀釋,就要根據以下原則,嚴謹操作和計算。

1、稀釋倍數合理。稀釋后樣本測定的OD值,要求落在標準品最高值OD值的半量程內,假定標準品最高值的OD值是2.4,那么稀釋后的樣本,OD值接近1.2,在這個范圍附近,計算的濃度值最為準確,以這個結果乘以稀釋倍數,得到的樣本濃度最準確。

2、稀釋過程規范。特別是大倍比的稀釋,最好是梯度稀釋。比如樣本要稀釋200倍,就先稀釋10倍,再在10倍稀釋的基礎上,再進行稀釋20倍,得到200倍。

3、樣本取樣量不要太小。在樣本充足的情況下,樣本取樣量不要低于5uL,越低的取樣量,在混勻取樣過程中,誤差越大。

*以上內容來自網絡

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